Методы исследования. Изучение распространение желудочно-кишечных паразитозов брали пробы фекалий от животных сельскохозяйственного значения, пробы от различных видов почвы, пробы растительности путем отбора их в пробирки для проб, датировались и нумеровали. В лаборатории исследовали флотационным методом насыщенного раствора хлористого натрия по Фюллеборну (1923). Копроовоскопические, ларвоскопические исследования проведение общепринятыми в гельминтологии методами. Проведены неполных гельминтологических вскрытий по К.И. Скрябину (1928). Подсчёт количества яиц и личинок в г фекалий на счётной камере ВИГИС, разработанной Л.Д. Мигачёвой и Г.А. Котельниковым (1987). Для дифференциальной диагностики использовали метод культивирования личинок стронгилят по П.А. Величкину (1967). Для исследование проб почвы и растительности по методу Романенко (1996) на исследование брали по 4 порции в 25 г почвы, яйца гельминтов всплывают и концентрируются в поверхностной пленке насыщенного раствора. Очень важно исключить какую-либо потерю поверхностной пленки. Для этого между краем пробирки и предметным стеклом оставляют пространство шириной не более 10 мм, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней стороной стекла, которое осторожно передвигают до полного покрытия центрифужной пробирки. Через 20 — 25 мин. отстаивания стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх, а на их место ставят другие (при необходимости и третьи). На предметные стекла с поверхностной пленкой наносят 1 — 2 капли 30 %-ного раствора глицерина, накрывают их покровными стеклами, а затем микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении в 80, а для определения степени их развития или деформации — в 400 раз.
Результаты исследования. Таким образом, проведение гельминтологических исследований для эколого-паразитологический контроля за объектами окружающей среды требует комплексно-динамическое изучение, по необходимости оценки источников и путей попадания инвазионного начала, их условий циркуляции, возбудителей паразитарных болезней, сроков развития. Вопрос охраны окружающей среды от возбудителей паразитарных болезней и проведение лечебно-профилактических имеет особую значимость и необходим для борьбы с распространением паразитарных болезней животных и загрязнение окружающей среды.
Известно, что применение длительное время одних групп антигельминтных препаратов длительное время приводит к снижению их эффективности и возникновению резистентности паразитов к данным препаратам и формируются устойчивые расы паразитов. Паразитирующие в организме сельскохозяйственных животных паразитические нематоды, причем выживаемость и скорость распространения превышает возможности химической промышленности по разработке новых препаратов (Waller, 1993, 1996; Теплякова Т.В., 1999). Известно давняя, но на долгие годы забытая идея исследования по биологическому контролю и регулирования численности паразитических нематод на свободнодвижущихся стадиях при помощи их естественных врагов (Сопрунов Ф.Ф, 1958; Тендетник Ю.Я, 1957; Шагалин С.Ф, 1960) хищных почвенных грибов, такой способ борьбы явно будет эффективным биологическим методом борьбы с нематодозами например, лошадей табунного содержания на пастбищах.
Одним из наиболее широко распространенных и часто встречающихся в почве хищных грибов является Arthrobotrys oligospora Fres., обладающий широким диапазоном приспособлений. В большинстве работ, посвященных данному виду хищных грибов, рассматривались, применение хищных грибов как регулятор численности паразитических нематод растений и возможность использование его для биологического контроля численности нематод паразитирующих в почве. Нами рассмотрено возможность выделения хищных нематофаговых грибов из мерзлотных почв Якутии и применения их, как основа для биологического препарата для борьбы нематодозов и против личинок нематод пастбищах, так и в обеззараживании отходов животноводства.
Нами разработана методика выделения штаммов хищных нематофаговых грибов рода Arthrobotrys, для этого использованы различные субстраты: гнилая древесина, труха, различные виды почвы (мерзлотно-палевой, суглинистой, дерново-подзолистой, лугово-черноземной, шерсти животных, содержимое кормушек фермы и др.), шерсть и фекалии — лошадей, крупного рогатого скота, баранов, снежных баранов, косуль, растительный покров пастбищ, остатки стога сена и др. Из всего исследованного материала нами выделены щтаммы Arthrobotrys oligospora. Методика получения хищных нематофаговых грибов заключается в том, что на питательную среду инокулируем споровой или мицелиальной культурой выделенными нами грибы, в том числе и хищного гриба относящейся к виду Arthrobotrys oligospora. Пробы от разных субстратов от почвы и фекалий, шерсти, растений и др. для выделения грибов Arthrobotrys oligospora высевали на приготовленные среды Чапека.
Гифы хищных грибов образуют различные вылавливающие приспособления, ловушки в форме клейких сплетений, которыми улавливают личинок нематод и переваривают их содержимое. Образованные колонии хищных грибов переносим в стерильный физиологический раствор для промывания. В стерильные чашки Петри разливаем тонким слоем среду Чапека, в центре чашки на его поверхность микологической иглой засеваем выделенные нами грибы. Чашки ставим в термостат при температуре +23˚-25˚С в течение четырех дней для развития грибов для дальнейших морфологических и цитологических изучений. Изучение морфологических и цитологических особенностей культуры изучают на временных препаратах, использовали краситель нейтральный красный в разведении 1:10000. Выделенные нематофаговые грибы периодически пересеваем на стерильную среду Чапека до выделения чистой культуры нематофаговых грибов.
Лабораторные опыты показали, что чем больше личинок нематод в чашке Петри, тем активнее рост хищных грибов, и у них быстро образуются хламидоспоры, мицелии и конидии. При наличии личинок нематод гифы хищных грибов быстро образуют различные вылавливающие приспособления, ловушки в форме клейких сплетений и которыми улавливают личинок нематод и переваривают их содержимое.
Данная методика предлагается для культивирования нематофаговых грибов в лабораторных условиях и для производства биологически активных средств на основе нематофагов. В методике предлагается использование различных питательных питательных сред и разные онтогенетические стадии для культивирования хищных грибов тем и отличается от ранее предлагаемых методик по выделению хищных грибов.
Наши опыты показали, что на питательные среды развитие нематофаговых грибов происходит не только из их спор, но и из фрагментов мицелия. Ранее было показано, что жизнеспособность фрагментов определяется исходной длиной фрагментов и строением мицелия. Наши исследование показывают, что хищные грибы могут расти и развиваться и в наиболее бедных и несбалансированных по питательным элементам средах, на таких, как простой агар и на среде лимитированному по азоту. Проявление активности грибов, как показали наши экспериментальные опыты рост грибов положительно коррелировало с быстрым развитием мицелия, с прибавление личинок стронгилят не снижало хищной активности, нематофаговых грибов наоборот наблюдали быстрый рост.