Пациенты отделений реанимации и интенсивной терапии хирурги-ческого стационара, специализирующегося на лечении тяжелых сочетанных ранений и травм, являются контингентом с повышенным риском развития внутрибольничных осложнений вследствие применения большого количества различных инвазивных методов (с использованием катетеров, дренажей и т.п.). Для профилактики этих осложнений пациентам с первых суток поступления в стационар, назначают интенсивную антибактериальную терапию, вследствие чего во многом инициируют развитие кандидоза. В связи с этим исследование биологических свойств внутрибольничных штаммов грибов р. Candida приобретает первостепенное значение.
Цель исследования – характеристика антибиотикорезистентности, комплекса факторов патогенности и персистенции клинических изолятов грибов р. Candida.
Материалы и методы
Были исследованы штаммы грибов, выделенных от пациентов, находившихся на лечении в отделении реанимации и интенсивной терапии хирургического стационара. Все больные находились в ОРИТ более 48 часов и далее в стационаре от 10 до 125 суток.
Посев материала (моча, мокрота, подключичный катетер) проводили на МПА с содержанием 5% крови, среду Уриселект-4 (Bio-Rad, США) и хромогенный агар (Laboratorios Conda S.A., Spain). Видовую принадлеж-ность выделенных штаммов грибов Candida определяли на основании результатов тест-системы AUXACOLOR 2 (BioRad, США).
Образование биоплёнок изучали на полистироловом планшете по ме-тодике [1] в нашей модификации: окрашенную раствором генцианвиолета биоплёнку бактерий экстрагировали этанолом, декантировали, разводили в 20 раз и измеряли оптическую плотность (ОП) на спектрофотометре ПЭ-5400 УФ при длине волны 560 нм.
Чувствительность к флуконазолу, амфотерицину определяли методом диффузии в агар в соответствии с МУК 4.2.1890-04 [2].
Результаты исследования
Инфекционные осложнения грибковой этиологии начинали раз-виваться у пациентов, начиная с седьмых суток нахождения в отделении реанимации и интенсивной терапии. Пациенты получали интенсивную антибактериальную терапию, у всех стоял мочевой катетер.
Грибы рода Candida были выделены из следующих субстратов в количестве 105 -106 КОЕ/мл: мокрота - 12% образцов, моча – 84%, подключичный катетер – 4% образцов. Среди них доминирующими были штаммы C.albicans (64%), C.tropicalis (20%), С.krusei и С. glabrata (по 8 %). Клинические изоляты Candida albicans были выделены из мочи, мокроты и катетеров, тогда как C. kruzei, C. tropicalis и C. glabrata были определены только в моче. Чаще всего, в 54,5% случаев, грибы выделялись из клинического материала в ассоциациях, состоящих из 2-х или 3-х видов культур. Сохраняется приоритет C.albicans в составе ассоциаций с Klebsiella sp., Acetobacter sp., E. coli.
При изучении антимикотической чувствительности обнаружено, что самая высокая чувствительность у всех видов наблюдалась к амфотерицину-В (96%, р < 0,001), наименьшая – к флуконазолу (28 %, р < 0,001).
Результаты показали, что независимо от чувствительности выделенных клинических изолятов р. Candida, выявлена способность к образованию био-пленок у 32 % (p< 0,01) штаммов (Таблица 1).
Таблица 1. Результаты плёнкообразующей способности клинических изолятов р. Candida
|
Микро-организ- мы |
Биомасса биоплёнки в ЕД оптической плотности (ОП560) |
|||||
|
кол-во штаммов |
низкий (< 0.5) |
кол-во штаммов |
средний (0.5–1.0) |
кол-во штаммов |
высокий (> 1.0) |
|
C. albicans |
7 |
0,13±0,02 |
5 |
0,828±0,01 |
4 |
1,98±0,13 |
C. tropicalis |
1 |
0,08 |
- |
- |
3 |
4,2±0,2 |
C. krusei |
2 |
0,06±0,01 |
- |
- |
- |
- |
С. glabrata |
- |
- |
1 |
0,82 |
1 |
1,34 |
Культуры, обладающие способностью образовывать плёнки, были вы-делены из мочи пациентов на 10-12 сутки пребывания в стационаре. Штаммы C. tropicalis обладали способностью к плёнкообразованию только в моноку-льтуре, тогда как изоляты C. albicans – как в монокультуре, так и в ассоциа-ции с Acetobacter sp. и E. coli. Кроме того, плёнкообразующие штаммы р. Candida были резистентны к флуконазолу.
Полученные данные подтверждают способность клинических изолятов р. Candida формировать биоплёнки. Это приобретает особое значение в от-делениях интенсивной терапии, хирургических стационарах, поскольку яв-ляется причиной возникновения тяжёлых катетерассоциированных нозоко-миальных инфекций, сепсисов.