Окрашивание. В некоторых случаях для выявления очень незначительных микроповреждений, например при определении повреждений твердых сортов пшеницы, и облегчения обнаружения других типов повреждений при органолептическом методе применяют специальный прием— окрашивают зерна различными красящими веществами перед просмотром их сквозь лупу. Этот прием основан на дифференцированном окрашивании оболочек зерна и тканей, находящихся под ними. Ткань под оболочками окрашивается более интенсивно в тех случаях, когда в ней есть царапины, трещины и другие повреждения.
Отобранные из навески зерна для определения количества поврежденных окрашивают каждую сотню отдельно. Для этого зерно помещают в стеклянную посуду (стакан, колбу, широкую пробирку), затем заливают раствором красителя и тщательно взбалтывают или перемешивают. Передерживать зерно в растворе не рекомендуется, так как при этом интенсивно окрашиваются оболочки, что затрудняет распознавание повреждений.
Затем раствор красителя сливают, зерно несколько раз промывают водой (до исчезновения окрашивания воды), потом рассыпают на фильтровальной или газетной бумаге, марле или на другой какой-либо хлопчатобумажной ткани для удаления оставшейся на зернах воды. Подсушенные зерна просматривают под лупой сразу же после окрашивания или в любые последующие дни, так как окраска на месте трещин не исчезает. Длительность обработки зерна растворами анилиновых и гистологических красителей и концентрация их установлены исследователями К. Я. Калашникова и М. Ф. Олимпиевой.
Лучшие анилиновые красители — черный, васильковый и голубой, а из гистологических.— индигокармин. Срок годности раствора красителя не ограничен. Для окрашивания сотни зерен (одной пробы) достаточно 80—120 см8 раствора. Чтобы красители не задерживались на мелких складках оболочек и не окрашивали неповрежденные зерна, целесообразно предварительно обработать всю пробу зерна в концентрированном растворе поваренной соли в течение 15 мин.
Использование аналиновых, гистологических и других красителей облегчает обнаружение микроповреждений, но затрудняет выделение (если это необходимо при исследованиях) поверхностных и глубоких повреждений, не позволяет установить, повреждены ли только оболочки или задеты и нижележащие ткани. Этот недостаток в значительной мере можно устранить, применяя двойное окрашивание. Сущность двойного окрашивания в следующем. Вначале пробу зерна (100 штук) помещают на 2 мин в 0,5%-ный раствор йода в йодистом калии, затем зерна промывают водой и для осветления поверхности зерна в течение полминуты обрабатывают 0,1 %-ным раствором едкого калия и вновь промывают водой. Все открытые трещины, царапины и ссадины на эндосперме окрашиваются в черный цвет (в результате взаимодействия йода с крахмалом зерна) и отчетливо просматриваются на поверхности зерна. Далее зерно в течение 3 мин вторично окрашивают в 0,5%-ном растворе конгорота и окончательно промывают водой. От воздействия конгорота все поврежденные места окрашиваются в красный цвет, что дает возможность более полно выявить повреждения зародыша и оболочек над эндоспермом. После дзойного окрашивания все зерна просматривают под лупой и разделяют их по типам микроповреждений в соответствии с принятой в данном исследовании классификацией травм.
Как дополнительный прием, обеспечивающий обнаружение микроповреждений зерна, наряду с окрашиванием можно применить способ обесцвечивания в кипящих растворах , некоторых химических соединений. Для этих целей можно использовать 2%-ный раствор гипохлорида натрия, в котором в течение 10—12 мин кипятят зерно, или 2—3%- ный раствор едкого калия при кипячении в течение 3 мин. После кипячения зерно промывают водой и просматривают сквозь лупу; все поврежденные места, в том числе зародыш, обесцвечиваются (бледнеют). Высокая точность этого приема отмечена на зерне озимой ржи, пшеницы, кукурузы.
Во Всесоюзном научно-исследовательском институте зернобобовых культур при испытании различных красителей для определения микроповрежденных семян установлено, что лучший краситель—однопроцентный раствор красного анилина: при температуре 40—45° через 1 мин все поврежденные места семян интенсивно окрашиваются и отчетливо видны на поверхности зерна.
Способы окрашивания и обесцвечивания зерна перед просмотром его под лупой повышают точность определения количества микроловрежденного зерна машинами и облегчают обнаружение наиболее мелких травм. Но эти способы применяют только при специальных исследованиях, так как требуют большего времени на анализы, специального оборудования, красящих и других химических материалов, соответствующих навыков.
Использование физических явлений и средств. Учитывая, что некоторые типы микроповреждений (например, внутренние трещины) у многих культур (рис, кукуруза) визуальным методом обнаружить нельзя, исследователи используют вспомогательные физические средства и явления для их установления (рентген, ультрафиолетовые лучи, просвечивание), некоторые из них облегчают установление и других типов микроповреждений, малозаметных даже под лупой.